血球计数板的使用方法

发布 2019-08-25 04:41:33 阅读 8575

血球计数板的构造和使用。

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.

1mm3.

计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图。

血球计数板的使用。

以计数酵母菌为例。

(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在**的计数室上加盖专用的厚玻片。

(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。

(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数。如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数**的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。

(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).

(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。

3.计算公式。

(1)16格×25格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数。

(2)25格x16格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数。

4.血球计数板的清洁。

血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。

微生物显微计数。

一、 测试目的。

通过酵母菌细胞计数考查学生血球计数板的使用能力。

二、 考试内容。

在规定的45min内,正确使用血球计数板对酵母菌样品进行观察并计数,要求各步骤正确。

三、 实验材料。

酵母菌悬液,血球计数板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管。.

四、 微生物实验考试评分表。

1.正确稀释菌液10分。

2.镜检计数室10分。

3.正确加样品制标本10分。

4.正确使用显微镜镜检40分。

5.正确测定计数结果20分。

6.清洗血球计数板10分。

离心机使用。

1.正确开关1

2.正确设置转速和时间2

3.正确配平2

4.正确使用量筒1

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